प्रवाह साइटोमेट्रीमा फिल्टरहरूको प्रयोग।

(फ्लो साइटोमेट्री, FCM) एक कोष विश्लेषक हो जसले दाग लागेको कोष मार्करहरूको प्रतिदीप्ति तीव्रता मापन गर्दछ। यो एकल कोषहरूको विश्लेषण र क्रमबद्धताको आधारमा विकसित गरिएको उच्च-प्रविधि प्रविधि हो। यसले कोषहरूको आकार, आन्तरिक संरचना, DNA, RNA, प्रोटीन, एन्टिजेन र अन्य भौतिक वा रासायनिक गुणहरू द्रुत रूपमा मापन र वर्गीकरण गर्न सक्छ, र यी वर्गीकरणहरूको सङ्कलनमा आधारित हुन सक्छ।

图片१

फ्लो साइटोमिटरमा मुख्यतया निम्न पाँच भागहरू हुन्छन्:

१ फ्लो चेम्बर र फ्लुइडिक्स प्रणाली

२ लेजर प्रकाश स्रोत र किरण आकार दिने प्रणाली

३ अप्टिकल प्रणाली

४ इलेक्ट्रोनिक्स, भण्डारण, प्रदर्शन र विश्लेषण प्रणाली

५ कोष क्रमबद्ध गर्ने प्रणाली

图片2

ती मध्ये, लेजर प्रकाश स्रोत र बीम गठन प्रणालीमा लेजर उत्तेजना प्रवाह साइटोमेट्रीमा प्रतिदीप्ति संकेतहरूको मुख्य मापन हो। उत्तेजना प्रकाशको तीव्रता र एक्सपोजर समय प्रतिदीप्ति संकेतको तीव्रतासँग सम्बन्धित छ। लेजर एक सुसंगत प्रकाश स्रोत हो जसले एकल-तरंगदैर्ध्य, उच्च-तीव्रता, र उच्च-स्थिरता रोशनी प्रदान गर्न सक्छ। यी आवश्यकताहरू पूरा गर्न यो आदर्श उत्तेजना प्रकाश स्रोत हो।

图片3

लेजर स्रोत र प्रवाह कक्षको बीचमा दुईवटा बेलनाकार लेन्सहरू छन्। यी लेन्सहरूले लेजर स्रोतबाट उत्सर्जित गोलाकार क्रस-सेक्शन भएको लेजर बीमलाई सानो क्रस-सेक्शन (२२ μm × ६६ μm) भएको अण्डाकार बीममा केन्द्रित गर्छन्। यस अण्डाकार बीम भित्रको लेजर ऊर्जा सामान्य वितरण अनुसार वितरित गरिन्छ, जसले लेजर पत्ता लगाउने क्षेत्रबाट गुज्रने कोशिकाहरूको लागि निरन्तर रोशनी तीव्रता सुनिश्चित गर्दछ। अर्कोतर्फ, अप्टिकल प्रणालीमा लेन्स, पिनहोल र फिल्टरहरूको धेरै सेटहरू हुन्छन्, जसलाई लगभग दुई समूहमा विभाजन गर्न सकिन्छ: प्रवाह कक्षको माथिल्लो र तलतिर।

图片4

फ्लो चेम्बरको अगाडि रहेको अप्टिकल प्रणालीमा लेन्स र पिनहोल हुन्छ। लेन्स र पिनहोल (सामान्यतया दुई लेन्स र एउटा पिनहोल) को मुख्य कार्य भनेको लेजर स्रोतद्वारा उत्सर्जित गोलाकार क्रस-सेक्शन भएको लेजर बीमलाई सानो क्रस-सेक्शन भएको अण्डाकार बीममा केन्द्रित गर्नु हो। यसले लेजर ऊर्जालाई सामान्य वितरण अनुसार वितरण गर्छ, लेजर पत्ता लगाउने क्षेत्रभरि कोषहरूको लागि निरन्तर रोशनीको तीव्रता सुनिश्चित गर्दै र आवारा प्रकाशबाट हुने हस्तक्षेपलाई कम गर्छ।

 

फिल्टरका तीन मुख्य प्रकारहरू छन्: 

१: लामो पास फिल्टर (LPF) - यसले निश्चित मानभन्दा बढी तरंगदैर्ध्य भएको प्रकाशलाई मात्र पार गर्न अनुमति दिन्छ।

२: सर्ट-पास फिल्टर (SPF) - यसले निश्चित मानभन्दा कम तरंगदैर्ध्य भएको प्रकाशलाई मात्र पार गर्न अनुमति दिन्छ।

३: ब्यान्डपास फिल्टर (BPF) - यसले निश्चित तरंगदैर्ध्य दायरामा प्रकाशलाई मात्र पार गर्न अनुमति दिन्छ।

फिल्टरहरूको विभिन्न संयोजनले फरक तरंगदैर्ध्यमा फ्लोरोसेन्स संकेतहरूलाई व्यक्तिगत फोटोमल्टीप्लायर ट्यूबहरू (PMTs) मा निर्देशित गर्न सक्छ। उदाहरणका लागि, PMT को अगाडि हरियो फ्लोरोसेन्स (FITC) पत्ता लगाउने फिल्टरहरू LPF550 र ​​BPF525 हुन्। PMT को अगाडि सुन्तला-रातो फ्लोरोसेन्स (PE) पत्ता लगाउने फिल्टरहरू LPF600 र BPF575 हुन्। PMT को अगाडि रातो फ्लोरोसेन्स (CY5) पत्ता लगाउने फिल्टरहरू LPF650 र BPF675 हुन्।

图片5

फ्लो साइटोमेट्री मुख्यतया कोशिका क्रमबद्ध गर्न प्रयोग गरिन्छ। कम्प्युटर प्रविधिको विकास, इम्युनोलोजीको विकास र मोनोक्लोनल एन्टिबडी प्रविधिको आविष्कारसँगै, जीवविज्ञान, चिकित्सा, फार्मेसी र अन्य क्षेत्रहरूमा यसको प्रयोग बढ्दो रूपमा व्यापक हुँदै गइरहेको छ। यी प्रयोगहरूमा कोशिका गतिशीलता विश्लेषण, कोशिका एपोप्टोसिस, कोशिका टाइपिङ, ट्युमर निदान, औषधि प्रभावकारिता विश्लेषण, आदि समावेश छन्।


पोस्ट समय: सेप्टेम्बर-२१-२०२३