(फ्लो साइटोमेट्री, FCM) एक सेल विश्लेषक हो जसले दाग सेल मार्करहरूको फ्लोरोसेन्स तीव्रता मापन गर्दछ। यो एकल कक्षहरूको विश्लेषण र क्रमबद्धताको आधारमा विकसित गरिएको उच्च प्रविधि हो। यसले कोशिकाहरूको आकार, आन्तरिक संरचना, डीएनए, आरएनए, प्रोटिन, एन्टिजेन्स र अन्य भौतिक वा रासायनिक गुणहरूलाई द्रुत रूपमा मापन र वर्गीकरण गर्न सक्छ, र यी वर्गीकरणहरूको सङ्कलनमा आधारित हुन सक्छ।
फ्लो साइटोमिटरमा मुख्यतया निम्न पाँच भागहरू हुन्छन्:
1 फ्लो चेम्बर र तरल पदार्थ प्रणाली
2 लेजर प्रकाश स्रोत र बीम आकार प्रणाली
3 अप्टिकल प्रणाली
4 इलेक्ट्रोनिक्स, भण्डारण, प्रदर्शन र विश्लेषण प्रणाली
5 सेल क्रमबद्ध प्रणाली
तिनीहरूमध्ये, लेजर प्रकाश स्रोत र बीम गठन प्रणालीमा लेजर उत्तेजना प्रवाह साइटोमेट्रीमा फ्लोरोसेन्स संकेतहरूको मुख्य मापन हो। उत्तेजना प्रकाशको तीव्रता र एक्सपोजर समय प्रतिदीप्ति संकेतको तीव्रतासँग सम्बन्धित छन्। लेजर एक सुसंगत प्रकाश स्रोत हो जसले एकल-तरंग लम्बाइ, उच्च-तीव्रता, र उच्च-स्थिरता रोशनी प्रदान गर्न सक्छ। यी आवश्यकताहरू पूरा गर्न यो आदर्श उत्तेजना प्रकाश स्रोत हो।
लेजर स्रोत र प्रवाह कक्ष बीच दुई बेलनाकार लेन्सहरू छन्। यी लेन्सहरूले लेजर स्रोतबाट सानो क्रस-सेक्शन (22 μm × 66 μm) भएको अण्डाकार बीममा उत्सर्जित गोलाकार क्रस-सेक्शनको साथ लेजर बीमलाई केन्द्रित गर्दछ। यो अण्डाकार किरण भित्रको लेजर ऊर्जा लेजर पत्ता लगाउने क्षेत्र मार्फत जाने कोशिकाहरूको लागि लगातार रोशनी तीव्रता सुनिश्चित गर्दै, सामान्य वितरण अनुसार वितरित गरिन्छ। अर्कोतर्फ, अप्टिकल प्रणालीले लेन्सहरू, पिनहोलहरू र फिल्टरहरूको धेरै सेटहरू समावेश गर्दछ, जसलाई लगभग दुई समूहहरूमा विभाजन गर्न सकिन्छ: प्रवाह कक्षको माथिल्लो भाग र डाउनस्ट्रीम।
प्रवाह कक्षको अगाडि अप्टिकल प्रणाली लेन्स र पिनहोल समावेश गर्दछ। लेन्स र पिनहोल (सामान्यतया दुई लेन्स र पिनहोल) को मुख्य कार्य लेजर स्रोत द्वारा उत्सर्जित गोलाकार क्रस-सेक्शनको साथ लेजर बीमलाई सानो क्रस-सेक्शनको साथ अण्डाकार बीममा केन्द्रित गर्नु हो। यसले लेजर ऊर्जालाई सामान्य वितरण अनुसार वितरण गर्दछ, लेजर पत्ता लगाउने क्षेत्र भरिका कोशिकाहरूको लागि लगातार रोशनीको तीव्रता सुनिश्चित गर्दै र आवारा प्रकाशबाट हस्तक्षेप कम गर्दै।
त्यहाँ तीन मुख्य प्रकारका फिल्टरहरू छन्:
1: लामो पास फिल्टर (LPF) - केवल एक विशिष्ट मान भन्दा उच्च तरंगदैर्ध्य संग प्रकाश पार गर्न अनुमति दिन्छ।
2: छोटो पास फिल्टर (SPF) - केवल एक विशेष मान भन्दा कम तरंगदैर्ध्य संग प्रकाश पास गर्न अनुमति दिन्छ।
3: ब्यान्डपास फिल्टर (BPF) - केवल एक विशिष्ट तरंगदैर्ध्य दायरामा प्रकाश पार गर्न अनुमति दिन्छ।
फिल्टरहरूको विभिन्न संयोजनहरूले विभिन्न तरंगदैर्ध्यमा फ्लोरोसेन्स संकेतहरूलाई व्यक्तिगत फोटोमल्टीप्लायर ट्यूबहरू (PMTs) मा निर्देशित गर्न सक्छ। उदाहरणका लागि, PMT को अगाडि हरियो प्रतिदीप्ति (FITC) पत्ता लगाउनका लागि फिल्टरहरू LPF550 र BPF525 हुन्। PMT को अगाडि सुन्तला-रातो फ्लोरोसेन्स (PE) पत्ता लगाउन प्रयोग गरिने फिल्टरहरू LPF600 र BPF575 हुन्। PMT को अगाडि रातो प्रतिदीप्ति (CY5) पत्ता लगाउनका लागि फिल्टरहरू LPF650 र BPF675 हुन्।
फ्लो साइटोमेट्री मुख्यतया सेल क्रमबद्ध गर्न प्रयोग गरिन्छ। कम्प्युटर प्रविधिको विकास, इम्युनोलोजीको विकास र मोनोक्लोनल एन्टिबडी प्रविधिको आविष्कारसँगै जीवविज्ञान, औषधि, फार्मेसी र अन्य क्षेत्रहरूमा यसको प्रयोगहरू बढ्दो रूपमा व्यापक हुँदै गइरहेका छन्। यी अनुप्रयोगहरूमा सेल गतिशीलता विश्लेषण, सेल एपोप्टोसिस, सेल टाइपिङ, ट्यूमर निदान, औषधि प्रभावकारिता विश्लेषण, आदि समावेश छन्।
पोस्ट समय: सेप्टेम्बर-21-2023
